问：LUC标记细胞小动物成瘤后检测底物需要注射到肿瘤部位吗?
答：在活体生物发光成像（BLI）中，D-荧光素（luciferin）经腹腔（IP）或皮下（SC）注射后即可通过血液循环到达全身各处，与已表达荧光素酶的肿瘤细胞反应，因此无需直接注射到肿瘤局部即可实现成像。
问：小动物成瘤后检测不到 LUC 荧光怎么办？
答：常见原因可按“表达-递送-反应-采集”四步排查,具体如下， 收藏起来，LUC标记的小动物实验轻松过关！
(一）表达环节
1. 荧光素酶（Luc）表达丢失：体外筛到的“阳性”克隆在体内传代或冻存后发生启动子甲基化、质粒丢失，导致实际表达量低于仪器检测限。
2. 免疫清除：在免疫健全小鼠中，Luc 作为外源蛋白可被CD8⁺ T细胞识别并杀伤高表达细胞，造成信号进行性下降甚至消失。
3. 启动子沉默：CMV 等病毒启动子易受 IFN-γ 等细胞因子影响而下调，尤其在炎症或坏死区域。
（二）底物递送环节驾驶安全
1. 底物量不足：腹腔注射剂量一般按150mg/kg计算，若称重或稀释有误，或动物麻醉过深导致循环衰竭，底物难以到达肿瘤。
2. 给药途径不当：皮下/尾静脉注射时漏液，或肿瘤血供差（中心大面积坏死），局部底物浓度低于Km值。
3. 底物失效：D-荧光素反复冻融、室温放置 >2h会降解；粉末受潮也会失活。
(三）反应环境环节
1. 缺氧：肿瘤>8 mm时中心常严重缺血缺氧，荧光素酶反应需O₂和ATP，缺氧区信号会显著减弱。
2. pH 过低：坏死核心区pH<6.5会抑制酶活。
3. 底物竞争/抑制：血中高浓度脂肪酸、抗生素（如四环素）或动物同时给予其他荧光试剂，可产生抑制或吸收。
(四）信号采集环节
1. 仪器参数设置：曝光时间过短（<1 s）、binning值过低、光圈未全开都会漏掉弱信号；背景扣除阈值设得过高也会把真实信号“归零”。
2. 毛发/位置干扰：黑毛或金属耳标对560nm光子吸收强；深部脏器（胰腺、颅内）未用37 °C预热台，也造成信号衰减。
3. 采集窗口错过：峰值一般在底物注射后10–15 min（小鼠），若延迟到 30min以后，信号已下降80%以上。
LUC检测不到怎么办？
① 体外再测一次细胞Luc活性（加底物立即发光可排除表达问题）；
② 同批底物在已知阳性瘤小鼠上测试，可排除底物/仪器因素；
③ 取瘤体做IHC或Western确认Luc蛋白是否仍在；
④ 若怀疑免疫清除，可改用Nude/NSG小鼠或短暂免疫抑制（环孢素3d）再挑战。
LUC检测不到怎么办？
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