细胞感染细菌模型在病原体与宿主相互作用、抗菌药物研发与筛选、感染性疾病治疗研究、疫苗效果评估与研发以及环境监测与食品安全等多个方面都有广泛的应用.但是在感染过程中稍不注意出现杂菌或者细胞死亡的现象。
1.将需要感染的细胞复苏好，待细胞生长平稳并达到90%以上的汇合度；
2.取-70℃保存的标准菌株50μL于5mL的液体LB中，置于37℃水浴恒温振荡器中200～300r/min培养12～14h让其复苏；
3.将复苏好的菌群至于琼脂板上，于37℃温箱中倒置培养6～10h，然后于无菌条件下挑取单个菌落于5mL LB培养基中，37℃水浴振荡培养6～10h，配制成4×10^8/mL的菌液；
4.将目的细胞消化，100×g离心5 min后弃上清，再用基础培养基重悬，稀释细胞浓度至5×10^4cells/ml并接种到24孔板中，置于37℃5％CO2恒温培养箱中培养过夜。
5.过夜后用无菌D-HanK′s洗涤3次，每孔加入100ul的菌液感染细胞，并在恒温恒湿细胞培养箱中相互作用2 h后用无菌PBS洗涤3次，随后加入1 mL含氯霉素(终浓度34 μg/mL)基础培养基继续培养1 h，然后用无菌PBS轻柔洗涤细胞3次，再加入1 mL DMEM继续培养1、2、4、6、8 h，后用无菌PBS轻柔洗涤3次。
6.再加入无菌水1 mL/孔使细胞完全裂解，稀释一定浓度后将菌液均匀涂布于LB固体平板上，对细胞内存活的细菌数进行计数。收集感染1、2、4、6、8 h的细胞，摄取率计算方法公式：细胞裂解出的细菌数/感染初始细菌数×100%。每个实验组重复3次，整体步骤重复3次。
感染模型的检测方法为：Hoechst33258染色法或Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术。
1000X支原体清除剂：
1. 采用抗支原体多肽合成剂配制，未发现细胞毒性作用，且治疗简单，可治愈99%以上的细胞支原体感染。
2. 灵活多用 ，稀释1000倍加入细胞培养两代可清除支原体 ，稀释2000倍可预防细胞支原体感染。
1000X黑胶虫清除剂：
1. 采用小分子抗生素合成配制，对细胞毒性小，杀菌能力强，第二天可看到明显的效果。
2. 使用方便， 1ml稀释1000倍即可使用。
检测步骤不清楚？可以关注我们下期公众号哦 ，更多细胞实验操作步骤，尽在启达生物！